Matériel
- Kit d’étude du microbiote de la drosophile de chez sordalab (ref.DROSOBIOTE)
Pour la dissection
- 2 pinces fines
- Une lame de microscope
- Une loupe bino (facultatif)
Pour la coloration
- Une boîte de pétri avec 2 allumettes collées pour poser la lame lors de la coloration
- 1 marqueur
- 1 sèche-cheveux
- Capsule en verre pour les rinçages
- 1 chronomètre
- Violet de gentiane
- Eau iodée (solution mère)
- Ethanol 95°
- Fuschine de ziehl
- Eau distillée
- Gants, lunettes
Protocole
Dissection
- Prélever à la pince fine la larve et appliquer l’avant portant les mandibules noires contre la lame.
- Tirer doucement sur l’extrémité postérieure de la larve en restant parallèle à la lame de façon à appliquer et coller le tube digestif progressivement contre le verre. L’étalement du tube digestif sur toute sa longueur est alors visible, laisser en place les extrémités du corps sur la lame, elles partiront éventuellement lors de la coloration.
- Sécher la lame à l’aide d’un sèche-cheveux afin de fixer la préparation sur la lame pendant 20 secondes.
Coloration
Pratiquer une coloration Gram (gants et lunettes, hotte ou pièce aérée) :
- Poser la lame dans la boîte de pétri
- Verser sur la préparation quelques gouttes de violet de gentiane, attendre 30 secondes.
- Rincer à l’eau distillée au-dessus de la capsule
- Verser sur la préparation quelques gouttes d’eau iodée, attendre 30 secondes.
- Rincer à l’éthanol au-dessus de la capsule.
- Verser sur la préparation quelques gouttes de Fuchsine, attendre 30 secondes.
- Rincer à l’eau distillée au-dessus de la capsule
- Sécher la lame au sèche-cheveux pendant 20 secondes.
Observation
- Observer au microscope, la lamelle est inutile.
Photo
Vidéo
Trucs et astuces
- Placer un nombre différent de points ou des lettres au blanco sur les lames pour pouvoir les distinguer après coloration (l’alcool, utilisé en rinçage, enlevant toute trace de marqueur).
- Le contenu de la capsule sera collecté dans un bidon colorant CMR
