Matériel
Pour l’hydrolyse :
- 3 tubes à essai
- 1 marqueur
- 1 plateau de coloration
- 3 pipettes de 1 mL et 1 propipette
- 3 pipettes plastiques
- Parafilm
- 1 bain marie à 37°C
- Chronomètre
- 1 flacon compte-goutte d’eau iodée C/2
- H2O D
- Empois d’amidon à 10g/L
- Amylase (ici en sirop soit 2 mL dans 100 mL d’H2O D)
- Amylosynthétase
Pour la synthèse :
- 3 tubes à essai
- 1 marqueur
- 1 plateau de coloration
- 3 pipettes de 1 mL et 1 propipette
- 3 pipettes plastiques
- Parafilm
- 1 bain marie à 37°C
- Chronomètre
- 1 flacon compte-goutte d’eau iodée C/2
- H2O D
- Glucose-1-phosphate 10g/L
- Amylase (ici en sirop soit 2 mL dans 100 mL d’H2O D)
- Amylosynthétase
Avant le TP
- Préparation de l’amylosynthétase : conservation ½ journée
Éplucher et couper 50 g de pomme de terre en petits morceaux
Broyer (au mixer ou dans un mortier) dans 30 mL d’eau distillée
Filtrer ou le plus rapide Centrifuger (5 min à 5000 tours/min)
Le filtrat contient l ‘enzyme
On peut réaliser un test à l ‘eau iodée pour vérifier l’absence d’amidon sinon réaliser une seconde filtration ou centrifugation.
Protocole
Réaliser les tests dans les conditions expérimentales suivantes :
-
- Attention mélanger chaque tube après avoir recouvert d’un parafilm.
- Prélever quelques gouttes pour réaliser le test de mise en évidence à t= 0 min avant de les placer dans le bain marie.
- Après qu’un tube soit prêt, placer le tout de suite dans le bain marie et déclencher le chrono.
- Réaliser le test de mise en évidence à t= 5 min.
- Pour réaliser le test de mise en évidence :
Prélever quelques gouttes du tube, mettre dans une cupule du plateau de coloration.
Ajouter 2 à 3 gouttes d’eau iodée.
Photo
Résultats
Trucs et astuces
- Préparer le glucose-1-phosphate le jour du TP, il ne se conserve pas
- L’amylase et l’empois d’amidon se conservent 2 semaines au réfrigérateur.
- Voir la fiche technique de préparation empois d’amidon.
- Les pipettes plastiques sont rallongées pour aller au fond du tube avec un embout coupé d’une autre pipette plastique.
- Le contenu du plateau de coloration sera collecté dans un bidon ion iodé.
Téléchargement
Synthèse et hydrolyse de l’amidon
